UOP熒光指示劑是一種檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光試劑。Fluo3若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與鈣離子Ca2+結(jié)合后熒光會增加60至80倍，是目前常用的一種鈣離子熒光探針。激光共聚焦熒光顯微鏡具有氬激光器，所以Fluo3可被廣泛使用于這種顯微鏡上。這種熒光信號發(fā)出來的長波也便于減小對樣品細(xì)胞的光損傷。Fluo3也可用來檢測紫外光照射下可裂解的熬合鈣或其它形式的鈣。Fluo3-AM是Fluo3的一種乙酰甲酯衍生物，通過培養(yǎng)，能夠輕易進(jìn)入細(xì)胞中。3-AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，激發(fā)波長為506mm，發(fā)射波長為526mm。

 

　　UOP熒光指示劑作用原理：

　　在實(shí)際工作中，肉眼是難以準(zhǔn)確地觀察出指示劑變色點(diǎn)顏色的微小的改變。人們目測酸堿指示劑從一種顏色變?yōu)榱硪环N顏色的過程，只能在一定的pH變化范圍內(nèi)才能發(fā)生，即只有當(dāng)一種顏色相當(dāng)于另一種顏色濃度的十倍時(shí)才能勉強(qiáng)辨認(rèn)其顏色的變化。在這種顏色變化的同時(shí)，介質(zhì)氫滅菌生物指示劑的pH值則由一個(gè)值變到另一個(gè)值。

 

　　可見溶液的顏色是在從pH=pKHIn-1到 pH=pKHIn+1的范圍內(nèi)變化的，這個(gè)范圍稱為指示劑的變色范圍即變色域。在變色范圍內(nèi)，當(dāng)溶液的pH值改變時(shí)，堿色成分和酸色成分的比值隨之改變，指示劑的顏色也發(fā)生改變。超出這個(gè)范圍，如pH≥pKHIn+1時(shí)，看到的只是堿色；而在pH≤pKHIn-1時(shí)，則看到的只是酸色。因此指示劑的變色范圍約2個(gè)pH單位。由于人的視覺對各種顏色的敏感程度不同，加上在變色域內(nèi)指示劑呈現(xiàn)混合色，兩種顏色互相影響觀察，所以實(shí)際觀察結(jié)果與理論值有差別，大多數(shù)指示劑的變色范圍小于2個(gè)PH單位。